Методы флюоресцентной детекции экспрессии генов в культуре клеток.

Флуоресценция является одной из разновидностей более общего явления люминесценции. Люминесценцией называется эмиссия ультрафиолетового, видимого или инфракрасного фотона из возбужденного вещества. Слово пришло из латинского языка (1итеп=свет) было впервые предложено как luminescenz физиком и историком науки Eilhardt Wiedemann в 1888 году для описания «всех тех феноменов света, которые определяются не только ростом температуры, в противоположность накаливанию». В настоящее время явление флуоресценции широко используется в биологических исследованиях.

---

Значительно проще купить решение задач по статистике, чем решать их самостоятельно. Переходите по ссылке, заполняйте форму заказа и вы получите решение любой задачи, даже самой сложной.

---

. Синтезировано огромное количество флуоресцентных меток, избирательно связывающихся с компонентами клеток, а также позволяющих отслеживать динамику различного рода параметров живых объектов во времени (таких как концентрации различных катионов, pH, движение органелл и др.). Суть флуоресцентных исследований сводится к внесению флуоресцентной метки (зонда) в живой или фиксированный объект и дальнейшая визуализация этого зонда с помощью флуоресцентного или конфокального микроскопа. При этом методы регистрации флуоресценции можно рассматривать как один из методов контрастирования, позволяющий визуализировать структуры, которые не видно в обычном микроскопе проходящего света Цель нашего исследования является изучить методы флюоресцентной детекции экспрессии генов в культуре клеток. Задачи исследования: 1. Изучить литературу по теме исследования. 2. Изучить особенности явления флюоресценции. 3. Изучить особенности флуоресцентного микроскопа. 4. Изучить методы создания флюоресцентных РНК-зондов. Курсовая работа состоит из введения, трех глав, заключения и списка литературы.

Микроскопия с двухфотонным возбуждением оказывается чрезвычайно полезной при динамической визуализации живых клеток в толстых образцах, особенно в интактных тканях. Благодаря этому методу стало возможным проведение многих экспериментов, невыполнимых традиционными методами, или в которых этими методами не удавалось получить необходимую информацию. Благодаря способности лазера с синхронизованными модами (импульсного лазера) создавать достаточную плотность фотонов в фокальной точке, двухфотонное возбуждение происходит лишь в фокальной плоскости. Преимущество локализованного возбуждения состоит в том, что испускание света ограничено узкой фокальной областью, что избавляет от необходимости использования точечной диафрагмы. Более того, ограниченная область возбуждения уменьшает фототоксичность исследуемых тканей, поскольку фотоповреждение в значительной степени ограничено фокальным участком. Хотя микроскопия с двухфотонным возбуждением не дает более высокого разрешения изображения, чем конфокальная микроскопия, она позволяет проникать в толстые образцы на большую глубину. Большая глубина проникновения возможна частично из-за геометрии «открытой» точечной диафрагмы в двухфотонном микроскопе, а также благодаря отсутствию внефокусного поглощения возбуждающего света и его меньшему рассеянию (из-за большей длины волны). Чтобы в полной мере воспользоваться возможностью глубокого проникновения, необходимо использовать конфигурацию детектирования нерассканированного сигнала, которая позволяет значительно повысить эффективность приема рассеянных флуоресцентных фотонов. Преимущества двухфотонного возбуждения уже не требуют подтверждений и позволяют проводить эксперименты, невыполнимые с помощью конфокальной микроскопии. Этот метод становится все более популярным благодаря технологическим достижениям и удешевлению оборудования, поэтому число интересных экспериментальных открытий, полученных с его помощью, скорее всего, будет расти.

1. Балалаева И.В., Сергеева Е.А., Катичев А.Р. Оптическая микроскопия в исследовании структуры и функций биологических объектов.– Нижний Новгород: Нижегородский госуниверситет, 2012. – 58 с. 2. Бережнов А.В., Зинченко В.П., Федотова Е.И.,Яшин В.А. Применение флуоресцентной микроскопии висследованиях динамики Са2+ в клетках. Пущино, 2007. - 65 с. 3. Гаврилов В. Б. Определение параметров связывания флуоресцентного зонда пирронового красного с сывороточным альбумином человека // Биофизика. — 2001.– Т. 46, Вып. 1. — С. 39–42. 4. Добрецов Г. Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов.– М.: Наука, 1989.– 277 с. 5. Летута С. Н., Маряхина В. С., Пашкевич С. Н., Рахматуллин Р. Р. Длительная люминесценция органических красителей в клетках биологических тканей // Оптика и спектроскопия. ? 2011. ? Т. 110, № 1. ? С. 72–75. 6. Рогоза Л.А. Флуоресцентные зонды для исследования пептидов. Biotechnologia Аcta, V. 6, No5, 2013. – р. 108-113. 7. Сайфитдинова А.Ф. Двумерная флуоресцентная микроскопия для анализа биологических образцов. – СПб.: «СОЛО», 2008-72 с. 8. Татарец А. Л., Поврозин Е. А., Дюбко Т. С. И др. Новые длинноволновые флуоресцентные зонды для исследования белков // Тез. докл. XXI Междунар. науч.-практ. конф. «Применение лазеров в медицине и биологии», Одесса, 26–29 мая 2004.— C. 134. 9. Alander, J. T., Kaartinen, I., Laakso, A., Patila, T., Spillmann, T., Tuchin, V. V., Venermo, M., Valisuo, P. A Review of Indocyanine Green Fluorescent Imaging in Surgery. // International Journal of Biomedical Imaging (2012). DOI:10.1155/2012/940585. 940585. 10. Joseph R. Lakowicz Principles of Fluorescence Spectroscopy. — Springer Science+Business Media, 2006. — ISBN 978-0-387-31278-1 11. Lavis, L. D.; Raines, R. T. Bright Ideas for Chemical Biology // ACS Chemical Biology 3 (2008) (3) С. 142—155. DOI:10.1021/cb700248m. 12. Zheng, H.; Zhan, X.-Q.; Bian, Q.-N.; Zhang, X.-J. Advances in modifying fluorescein and rhodamine fluorophores as fluorescent chemosensors // Chemical Communications 49 (2012) С. 429—447. DOI:10.1039/c2cc35997a.